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  • 產品名稱:APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑

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  • 產品廠商:其它品牌
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簡單介紹:
我公司總代理,華東地區代理APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑專業經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養基、一抗、二抗、其產品吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA實驗等。 總代理,華東地區代理APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑產品涉及分子生物學、細胞生物學、菌學、遺傳學、生物化學、蛋白質學、細胞療、臨床應用等領域??偞?華東地區代理范圍內免費運輸,如出現運輸質量問題,我們可以包退換貨。APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑完善的庫存及供應體系以及高效穩定的純化技術,保證產品均能現貨供應和產品質量的穩定性。
詳情介紹:
關鍵詞:APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑
簡介:我公司總代理,華東地區代理APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑專業經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養基、一抗、二抗、其產品吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA實驗等。
總代理,華東地區代理APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑產品涉及分子生物學、細胞生物學、菌學、遺傳學、生物化學、蛋白質學、細胞療、臨床應用等領域??偞?華東地區代理范圍內免費運輸,如出現運輸質量問題,我們可以包退換貨。APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑完善的庫存及供應體系以及高效穩定的純化技術,保證產品均能現貨供應和產品質量的穩定性。
品牌名稱:   APOH-TECHNOLOGIES蛋白、抗體及相關試劑
【生物分子】 抗真菌素 維生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖類 白三烯 前列腺素 藥結合物 抗氧化劑 藥理活性化合物 類固醇素結合物 半抗原反應 半抗原載體結合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 親和素/鏈霉親和素
【蛋白質/抗原/多肽】 球蛋白 封閉肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 細胞質蛋白 總蛋白 膜蛋白 核蛋白 細胞裂解和提取物 線粒體蛋白 細胞裂解 組織提取 重組細胞因子 
【常用生化試劑】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物學緩沖液 蛋白生化緩沖液 去垢劑 染色試劑 溶劑 酸堿 化學試劑 其它生化試劑
【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR試劑 PCR對照 特異性PCR試劑盒 PCR克隆試劑盒 RNA 載體及構建 PCR克隆載體 M13克隆載體 菌克隆載體 文庫及構建 cDNA文庫 基因組文庫 噬菌體展示文庫
【酶】限制性內切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 連接酶
【cDNA及合成純化】cDNA全長基因 RNA cDNA合成 cDNA相關試劑
【核酸/蛋白合成】Oligo純化 核酸合成柱 核酸合成試劑
【克隆與表達】克隆基因 克隆試劑盒 克隆篩選
【表達分析】 Northern印跡分析 分支DNA和mRNA定量
【蛋白分析】 PAGE凝膠制備 蛋白電泳試劑 預制蛋白凝膠
【核酸純化】 DNA凝膠純化 DNA提取純化 PCR產物純化
【RNAi技術】 siRNA 反義寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文庫
【蛋白檢測】 Western印跡 報告基因檢測 蛋白檢測試劑盒
【實驗動物】 轉基因動物 小鼠 大鼠 模式動物
【臨床檢測試劑】 生化檢測 遺傳學檢測 血液檢測
【相關檢驗試劑】 食品檢測 藥品檢測
【蛋白純化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白穩定
【細胞培養】 血清 血清替代物 細胞培養基 細胞 細胞株 感受態細胞 新鮮細胞分離
【干細胞】 干細胞/祖細胞 原代細胞 干細胞培養基
【蛋白修飾】 蛋白標記 載體蛋白結合 其它
【細胞生物學檢測】 細胞凋亡 細胞分離 細胞增殖
【篩選】 熒光素細胞活力/增殖/毒性檢測
【檢測】 放射性檢測 化學發光檢測
【檢驗原理】
試劑盒組成及試劑配制
1.        酶聯板:一塊(96孔)
2.        標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為1,600 pg/ml,將其稀釋為400 pg/ml后,再做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別稀釋成400 pg/ml,200 pg/ml,100 pg/ml,50 pg/ml,25 pg/ml,12.5 pg/ml,6.25 pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/ml,臨用前15分鐘內配制。如配制200 pg/ml標準品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 400 pg/ml的上述標準品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3.        樣品稀釋液:1×20ml。
4.        檢測稀釋液A:1×10ml。
5.        檢測稀釋液B:1×10ml。
6.        檢測溶液A:1×120μl(1:100)臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,稀釋前根據預先計算好的每次實驗所需的總量配制(100μl/孔),實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl檢測溶液A加990μl檢測稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制。
7.        檢測溶液B:1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8.        底物溶液:1×10ml/瓶。
9.        濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10.    終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11.    覆膜:5張
自備物品
1.   酶標儀(建議參考儀器使用說明提前預熱)
2.   微量加液器及吸頭,EP管
3.   蒸餾水或去離子水,全新濾紙
標本的采集及保存
1.        血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2.        血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3.        其它生物標本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
4.        樣本處理:血清或血漿標本推薦稀釋5,000倍。
注:以上標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響*后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。 
操作步驟
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1.        加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
4.        每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5.        溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.        依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8.        用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后立即進行檢測。
注:
1.  試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。
洗板方法
1.  手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,浸泡1-2分鐘,根據需要,重復此過程數次。
2.  自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
  以標準物的濃度為縱坐標(對數坐標),OD值為橫坐標(對數坐標),在對數坐標紙上繪出標準曲線。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析,如curve expert 1.3,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
 ◇      注意事項:
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分標本需添加抑肽酶。
◇      液體類標本
標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。
◇      血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
◇      血漿:
應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
◇      尿液、胸腹水、腦脊液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
◇      細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
◇      組織標本:
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
寄標本時需注明以下情況:
標本編號;2、所測項目;3、是否做復孔;3、聯系方式;4、實驗后標本是否寄回

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